Статья : Методы определения N-концевой аминокислоты 


Полнотекстовый поиск по базе:

Главная >> Статья >> Биология и химия


Методы определения N-концевой аминокислоты




Методы определения N-концевой аминокислоты

Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф.

Для определения природы N-концевой аминокислоты предложен ряд методов, в частности метод Сэнджера (F. Sanger), основанный на реакции арилирования полипептида 2,4-динитрофторбензолом (ДНФБ), что приводит к образованию окрашенного в желтый цвет 2,4-динитрофенильного производного N-концевой аминокислоты . Раствор полипептида обрабатывают ДНФБ, который взаимодействует со свободной NH3-группой N-концевой аминокислоты пептида.

После кислотного гидролиза продукта реакции – динитрофенилпептида только одна N-концевая аминокислота оказывается связанной с реактивом в виде 2,4-динитрофениламинокислоты (стабильной при гидролизе). В отличие от других образовавшихся при гидролизе полипептида свободных аминокислот она желтого цвета. Ее идентифицируют методом хроматографии.

Для определения N-концевой аминокислоты значительно более широко применяется фенилтиогидантоиновый метод Эдмана благодаря своей высокой чувствительности и возможности многократного использования в одной и той же пробе. Фенилизотиоцианат реагирует со свободной α-NH3-группой N-концевой аминокислоты полипептида с образованием фенилтиокарбамоилпептида.

Обработка продукта реакции кислотой приводит к циклизации и освобождению фенилтиогидантоина N-концевой аминокислоты, природу которого устанавливают хроматографически. Укороченный на одну аминокислоту полипептид подвергают дальнейшему анализу.

Эту процедуру ступенчатого расщепления пептида с N-конца можно повторять многократно, идентифицируя последовательно одну аминокислоту за другой. Метод Эдмана используется в качестве химической основы для определения первичной структуры белков и пептидов. Он реализован в специальном приборе – секвенаторе (от англ. sequence – последовательность), работающем в автоматическом режиме и позволяющем определить последовательность аминокислот с N-конца пептида до 50–60 аминокислотных остатков.

Кроме этих реактивов, для определения чередования аминокислот используют цианат калия, 1-диметиламинонафтил-5-сульфонилхлорид – дан-силхлорид и дабсилхлорид. Для этих же целей иногда применяют ферменты экзопептидазы, в частности аланин- и лейцинаминопептидазу. Эти ферменты разрывают пептидные связи с того конца полипептида, где имеется свободная NН2-группа, освобождая N-концевую аминокислоту (механизм действия экзопептидаз см. в главе 12).

Список литературы

Для подготовки данной работы были использованы материалы с сайта http://www.xumuk.ru/

Похожие работы:

  • Методи исследования клеток

    Курсовая работа >> Биология
    ... пептидную связь. Высвобождающуюся аминокислоту идентифицируют методом хроматографии. Оставшийся пептид ... коду. Рассмотрим два метода определения молекул внутри клеток: ... участки. Эти одноцепочечные концевые участки обладают способностью образовывать ...
  • Аминокислоты и РНК

    Курсовая работа >> Медицина, здоровье
    ... нативная конформация, установленная методом рентгеноструктурного анализа и названная ... нуклеотиды ответственны за включение определенной аминокислоты в белковую молекулу и ... 2'- или 3'- гидроксильной группе концевого остатка аденозина. Аминоацильная группа ...
  • Методы разделения иммуноглобулинов

    Реферат >> Химия
    ... которых отличается С- концевой последовательностью аминокислот. Как тяжелые, ... части полипептидных цепей находятся опре­деленные, так называемые "гипервариабельные ... Стоев (1979) разработал методы выделения и количественного определения D и Е иммуноглобулинов ...
  • Белки

    Реферат >> Химия
    ... образовываться все эти аминокислоты или некоторые из них в определенных пропорциях, характерных для ... полимера, а с N-концевой аминокислоты снимается защитная группа. Преимущество этого метода по сравнению с классическими методами синтеза ...
  • Гипотеза мира РНК

    Курсовая работа >> Биология
    ... трансляции завершается присоединением выбранной молекулы аминокислоты к С-концевой аминокислоте синтезируемой цепи белка посредством пептидной ... не экспрессируется. Существует ряд методов, позволяющих подавлять экспрессию определенных генов, в том числе ...
  • Биосинтез белка и его регуляция

    Реферат >> Биология
    ... кодону соответствует только одна определенная аминокислота. В этом смысле ... нативная конформация, установленная методом рентгеноструктурного анализа и названная ... необходимым запасом энергии. Аминокислота присоединяется к концевому 3-ОН-гидроксилу АМФ ...
  • Аппарат экспрессии генов и его логика

    Курсовая работа >> Биология
    ... для их определения было невозможно. Ситуация резко изменилась с появлением методов молекулярного клонирования ... карбоксильным концом с тРНК, которая соответствует С-концевой аминокислоте в растущей полипептидной цепи. 5. Пептидилтрансфераза катализирует ...
  • Нормальная физиология

    Учебное пособие >> Биология
    ... – миниатюрные потенциалы концевой пластинки. При ... выраженная деполяризация, называемая потенциалом концевой пластинки. В отличие от ... определенное пластическое значение. Глюкоза необходима для образования нуклеотидов и синтеза некоторых аминокислот. Методы ...
  • Физиология

    Шпаргалка >> Медицина, здоровье
    ... организме? 3.Назовите основные методы определения количества энергии в навеске ( ... калия - деполяризация концевой пластинки (потенциал концевой пластинки)- развитие ... и небелковые азотсодержащие соединения (аминокислоты и полипептиды,продукты распада белков ...